吖啶橙 AO（ PI ）双荧光染⾊试剂盒

吖啶橙 AO / PI 双荧光染⾊试剂盒

货号：JC0318 

规格：1ml/5ml

产品描述

AO/PI 双荧光计数法用来检测细胞浓度和活率。细胞染色液由吖啶橙（绿色荧光染料）和碘化丙锭（红色荧光染料）混合而成。碘化丙锭（PI）不具有膜透过性，只能进入细胞膜受损的细胞，而吖啶橙能够穿过所有的细胞群体。当两种染料同时存在于细胞核中，碘化丙锭通过荧光共振能量转移（FRET）引起吖啶橙荧光的减少。因此，在 Countstar® Rigel 系统中，具有完整的有核细胞染绿色荧光并被计为活细胞，而具有受损的有核细胞染红色荧光并被计为死细胞。

吖啶橙(Acridine Orange), 属于三环杂芳香染料，是经典的、极灵敏的特异染性荧光染料，可以标记DNA、RNA，属于异染性荧光染料，AO常用于细胞内DNA和RNA进行检测。AO与核酸结合方式主要有：1、插入性结合，AO嵌入核酸双链的碱基对之间，这种结合方式主要为AO与DNA的结合，其荧光发射峰为530nm，激发后呈绿色荧光，其荧光发射峰为640nm，激发后呈红色荧光，少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。因此，AO嵌合到双链DNA分子中显绿色，与DNA单链或RNA结合时发橙红色荧光。本试剂盒中AO与核酸结合的方式是插入性结合，因此激发后呈绿色荧光。经AO染色后，正常细胞的细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体，AO使其染上致密浓染的黄绿色荧光或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。

碘化丙啶(PI)是一种非细胞膜通透性荧光染料，与DNA结合后的最大激发光波长为535nm，最大发射光波长为617nm，不能穿过具有生物活 性的细胞质膜，只能对于坏死细胞因为其细胞膜缺乏完整性而能到达细胞核[1, 2]，并嵌入坏死细胞的DNA双螺旋形成PI-DNA复合物从而产生红色荧光，因此PI仅能对死细胞染色，因此被用来区分正常细胞与坏死细胞。须特别注意凋亡细胞会因为其细胞膜的完整性，而无法被PI染色，仅在凋亡后期发生继发性坏死(Secondary necrosis)时，才能被PI染色。